We hebben vorige week verschillende overwegingen gedeeld voor het gebruik van celluloseacetaatmembraanelektroforese, en we zullen dit onderwerp hier vandaag ter referentie afronden.
Selectie van Bufferconcentratie
De bufferconcentratie die wordt gebruikt bij elektroforese van celluloseacetaatmembraan is over het algemeen lager dan die gebruikt bij elektroforese van papier.De veelgebruikte pH 8,6Barbitrale buffer wordt doorgaans gekozen binnen het bereik van 0,05 mol/l tot 0,09 mol/l.Bij het selecteren van de concentratie wordt een voorlopige bepaling gedaan.Als de lengte van de membraanstrook tussen de elektroden in de elektroforesekamer bijvoorbeeld 8-10 cm bedraagt, is een spanning van 25 V per centimeter membraanlengte vereist en moet de stroomsterkte 0,4-0,5 mA per centimeter membraanbreedte zijn.Als deze waarden tijdens de elektroforese niet worden bereikt of overschreden, moet de bufferconcentratie worden verhoogd of verdund.
Een te lage bufferconcentratie zal resulteren in een snelle beweging van de banden en een toename van de bandbreedte.Aan de andere kant zal een te hoge bufferconcentratie de bandmigratie vertragen, waardoor het moeilijk wordt om bepaalde scheidingsbanden te onderscheiden.
Opgemerkt moet worden dat bij elektroforese met celluloseacetaatmembraan een aanzienlijk deel van de stroom door het monster wordt geleid, waardoor een aanzienlijke hoeveelheid warmte ontstaat.Soms kan de gekozen bufferconcentratie als passend worden beschouwd.Onder omstandigheden van verhoogde omgevingstemperatuur of bij gebruik van een hogere spanning kan de verdamping van water als gevolg van de hitte echter toenemen, wat resulteert in een te hoge bufferconcentratie en zelfs tot uitdroging van het membraan kan leiden.
Monstervolume
Bij celluloseacetaatmembraanelektroforese wordt de hoeveelheid monstervolume bepaald door verschillende factoren, waaronder elektroforeseomstandigheden, eigenschappen van het monster zelf, kleuringsmethoden en detectietechnieken.Als algemeen principe geldt: hoe gevoeliger de detectiemethode, hoe kleiner het monstervolume kan zijn, wat voordelig is voor de scheiding.Als het monstervolume te groot is, zijn de elektroforetische scheidingspatronen mogelijk niet duidelijk en kan kleuring ook tijdrovend zijn.Bij het kwantitatief analyseren van de gescheiden gekleurde banden met behulp van colorimetrische elutiemethoden mag het monstervolume echter niet te klein zijn, omdat dit kan resulteren in lagere absorptiewaarden voor bepaalde componenten, wat leidt tot grotere fouten bij het berekenen van hun inhoud.In dergelijke gevallen moet het monstervolume op passende wijze worden vergroot.
Normaal gesproken varieert het monstervolume dat op elke centimeter van de monsteraanbrenglijn wordt toegevoegd van 0,1 tot 5 μl, wat overeenkomt met een monsterhoeveelheid van 5 tot 1000 μg.Bij routinematige elektroforese-analyse van serumeiwitten bedraagt het monstervolume dat op elke centimeter van de aanbrenglijn wordt toegevoegd bijvoorbeeld doorgaans niet meer dan 1 μl, wat overeenkomt met 60 tot 80 μg eiwit.Wanneer u echter lipoproteïnen of glycoproteïnen analyseert met dezelfde elektroforesemethode, moet het monstervolume dienovereenkomstig worden vergroot.
Concluderend moet het meest geschikte monstervolume worden geselecteerd op basis van specifieke omstandigheden door middel van een reeks voorbereidende experimenten.
Selectie van kleuroplossing
De gescheiden banden bij elektroforese van celluloseacetaatmembraan worden doorgaans vóór detectie gekleurd.Verschillende monstercomponenten vereisen verschillende kleurmethoden, en de kleurmethoden die geschikt zijn voor celluloseacetaatmembraanelektroforese zijn mogelijk niet volledig toepasbaar op filterpapier.
Er zijn drie belangrijke principes waarvoor u een kleuroplossing moet kiezencelluloseacetaatmembraan.Ten eerste,In water oplosbare kleurstoffen verdienen de voorkeur boven in alcohol oplosbare kleurstoffen om membraankrimp en vervorming veroorzaakt door de kleuroplossing van laatstgenoemde te voorkomen.Na het kleuren is het belangrijk om het membraan met water te spoelen om de duur van de kleuring te minimaliseren.Anders kan het membraan opkrullen of krimpen, wat de daaropvolgende detectie zou beïnvloeden.
Ten tweede verdient het de voorkeur om kleurstoffen te selecteren met een sterke kleuringsaffiniteit voor het monster.Bij celluloseacetaatmembraanelektroforese van serumeiwitten wordt aminozwart 10B vaak gebruikt vanwege zijn sterke kleuringsaffiniteit voor verschillende serumeiwitcomponenten en zijn stabiliteit.
Ten derde moeten kleurstoffen van betrouwbare kwaliteit worden gekozen.Sommige kleurstoffen kunnen, ondanks dat ze dezelfde naam hebben, onzuiverheden bevatten die na kleuring resulteren in een bijzonder donkere achtergrond.Hierdoor kunnen de oorspronkelijk goed gescheiden banden zelfs vervagen, waardoor ze moeilijk te onderscheiden zijn.
Ten slotte is de keuze van de concentratie van de kleuroplossing belangrijk.Theoretisch zou het erop kunnen lijken dat een hogere kleuroplossingconcentratie zou leiden tot een grondigere kleuring van monstercomponenten en betere kleuringsresultaten.Dit is echter niet het geval.De bindingsaffiniteit tussen de monstercomponenten en de kleurstof heeft een bepaalde limiet, die niet toeneemt met de toename van de concentratie van de kleuroplossing.Integendeel, een te hoge concentratie kleuroplossing verspilt niet alleen de kleurstof, maar maakt het ook moeilijk om een heldere achtergrond te verkrijgen.Bovendien volgt, wanneer de kleurintensiteit een bepaalde maximale waarde bereikt, de absorptiecurve van de kleurstof geen lineair verband, vooral niet bij kwantitatieve metingen. Bij celluloseacetaatmembraanelektroforese is de concentratie van de kleuroplossing over het algemeen lager dan die gebruikt bij papierelektroforese.
Details om te weten over Beijing Liuyi Biotechnologie's celluloseacetaatmembraanelektroforesetank en de elektroforesetoepassing, bezoek hier:
lExperiment voor het scheiden van serumeiwit door celluloseacetaatmembraan
lCelluloseacetaatmembraan-elektroforese
Als u een aankoopplan heeft voor onze producten, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen.U kunt ons een bericht sturen via e-mail[e-mailadres beveiligd]of[e-mailadres beveiligd], of bel ons op +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 toe, of Wechat: 15810650221.
Referentie:Elektroforese (tweede editie) door de heer Li
Posttijd: 06-jun-2023