Polyacrylamidegelelektroforese
Gelelektroforese is een fundamentele techniek in laboratoria in alle biologische disciplines, die de scheiding van macromoleculen zoals DNA, RNA en eiwitten mogelijk maakt. Verschillende scheidingsmedia en -mechanismen maken het mogelijk dat subsets van deze moleculen effectiever worden gescheiden door gebruik te maken van hun fysieke kenmerken. Vooral voor eiwitten is polyacrylamidegelelektroforese (PAGE) vaak de techniek bij uitstek.
PAGE is een techniek die macromoleculen zoals eiwitten scheidt op basis van hun elektroforetische mobiliteit, dat wil zeggen het vermogen van analyten om naar een elektrode met de tegenovergestelde lading te bewegen. Bij PAGE wordt dit bepaald door de lading, de grootte (molecuulgewicht) en de vorm van het molecuul. Analyten bewegen door poriën gevormd in polyacrylamidegel. In tegenstelling tot DNA en RNA variëren de ladingen van eiwitten afhankelijk van de aminozuren die ze hebben opgenomen, wat de werking ervan kan beïnvloeden. Aminozuurstrengen kunnen ook secundaire structuren vormen die van invloed zijn op hun schijnbare grootte en bijgevolg op de manier waarop ze door de poriën kunnen bewegen. Het kan daarom soms wenselijk zijn om eiwitten voorafgaand aan de elektroforese te denatureren om ze te lineariseren als een nauwkeurigere schatting van de grootte vereist is.
SDS-PAGINA
Natriumdodecylsulfaatpolyacrylamidegelelektroforese is een techniek die wordt gebruikt om eiwitmoleculen met een massa van 5 tot 250 kDa te scheiden. De eiwitten worden uitsluitend op basis van hun molecuulgewicht gescheiden. Natriumdodecylsulfaat, een anionische oppervlakteactieve stof, wordt toegevoegd bij de bereiding van gels die de intrinsieke ladingen van de eiwitmonsters maskeert en ze een vergelijkbare verhouding tussen lading en massa geeft. In eenvoudige woorden: het denatureert de eiwitten en geeft ze een negatieve lading.
Native PAGINA
Native PAGE is een techniek die niet-gedenatureerde gels gebruikt voor de scheiding van eiwitten. In tegenstelling tot SDS PAGE wordt bij de bereiding van gels geen denatureermiddel toegevoegd. Hierdoor vindt de scheiding van eiwitten plaats op basis van lading en grootte van de eiwitten. Bij deze techniek zijn de conformatie, vouwing en aminozuurketens van de eiwitten de factoren waarvan de scheiding afhankelijk is. De eiwitten worden tijdens dit proces niet beschadigd en kunnen na voltooiing van de scheiding worden teruggewonnen.
Hoe werkt polyacrylamidegelelektroforese (PAGE)?
Het basisprincipe van PAGE is het scheiden van analyten door ze met behulp van elektrische stroom door de poriën van een polyacrylamidegel te leiden. Om dit te bereiken wordt een acrylamide-bisacrylamidemengsel gepolymeriseerd (polyacrylamide) door toevoeging van ammoniumpersulfaat (APS). De reactie, die wordt gekatalyseerd door tetramethylethyleendiamine (TEMED), vormt een netachtige structuur met poriën waardoor analyten kunnen bewegen (Figuur 2). Hoe hoger het percentage totaal acrylamide in de gel, hoe kleiner de poriegrootte, en dus hoe kleiner de eiwitten die er doorheen kunnen. De verhouding acrylamide tot bisacrylamide heeft ook invloed op de poriegrootte, maar deze wordt vaak constant gehouden. Kleinere poriegroottes verminderen ook de snelheid waarmee kleine eiwitten door de gel kunnen bewegen, waardoor hun resolutie wordt verbeterd en wordt voorkomen dat ze snel in de buffer terechtkomen als er stroom wordt toegepast.
Apparatuur voor polyacrylamidegelelektroforese
Gel-elektroforesecel (tank/kamer)
De geltank voor polyacrylamidegelelektroforese (PAGE) verschilt van de agarosegeltank. De agarosegeltank is horizontaal, terwijl de PAGE-tank verticaal is. Door een verticale elektroforesecel (tank/kamer) wordt een dunne gel (normaal 1,0 mm of 1,5 mm) tussen twee glasplaten gegoten en zo gemonteerd dat de onderkant van de gel in één kamer in buffer wordt ondergedompeld en de bovenkant in buffer wordt ondergedompeld in een andere kamer. Wanneer stroom wordt toegepast, migreert een kleine hoeveelheid buffer door de gel van de bovenste kamer naar de onderste kamer. Met sterke klemmen om te garanderen dat het geheel rechtop blijft staan, maakt de apparatuur snelle gelruns mogelijk met gelijkmatige koeling, wat resulteert in duidelijke banden.
Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) produceert polyacrylamidegelelektroforesecellen (tanks/kamers) in verschillende maten. De modellen DYCZ-20C en DYCZ-20G zijn verticale elektroforesecellen (tanks/kamers) voor DNA-sequencing-analyse. Sommige verticale elektroforesecellen (tanks/kamers) zijn compatibel met het blottingsysteem, zoals het model DYCZ-24DN, DYCZ-25D en DYCZ-25E zijn compatibel met het Western Blotting-systeem model DYCZ-40D, DYCZ-40G en DYCZ-40F, die worden gebruikt voor het overbrengen van het eiwitmolecuul van de gel naar het membraan. Na SDS-PAGE-elektroforese is Western Blotting een techniek om een specifiek eiwit in een eiwitmengsel te detecteren. U kunt deze blottingsystemen kiezen op basis van de experimentele vereisten.
Elektroforese voeding
Om de elektriciteit voor het laten werken van de gel te leveren, hebt u een elektroforese-voeding nodig. Bij Liuyi Biotechnology bieden we een reeks elektroforesevoedingen voor alle toepassingen. Het model DYY-12 en DYY-12C met hoge stabiele spanning en stroom kunnen voldoen aan elektroforese met hoge spanning. Het heeft de functie van stand, timing, VH en stapsgewijze toepassing. Ze zijn ideaal voor IEF- en DNA-sequencing-elektroforesetoepassingen. Voor algemene eiwit- en DNA-elektroforese-toepassingen hebben we het model DYY-2C, DYY-6C, DYY-10, enzovoort, die ook populaire stroomvoorzieningen zijn met elektroforesecellen (tanks/kamers). Deze kunnen worden gebruikt voor elektroforesetoepassingen op midden- en laagspanning, zoals voor gebruik in schoollaboratoria, ziekenhuislaboratoria, enzovoort. Meer modellen voor voedingen, bezoek onze website.
Het merk Liuyi heeft meer dan 50 jaar geschiedenis in China en het bedrijf kan over de hele wereld stabiele en hoogwaardige producten leveren. Door jarenlange ontwikkeling is het uw keuze waard!
Voor meer informatie over ons kunt u per e-mail contact met ons opnemen[e-mailadres beveiligd] or [e-mailadres beveiligd].
Referenties voor Wat is polyacrylamidegelelektroforese?
1. Karen Steward PhD Polyacrylamidegelelektroforese, hoe het werkt, techniekvarianten en de toepassingen ervan
Posttijd: 23 mei 2022