Invoering
Gelelektroforese is een fundamentele techniek in de moleculaire biologie en wordt veel gebruikt voor de scheiding van eiwitten, nucleïnezuren en andere macromoleculen. Een goede controle van het monstervolume, de spanning en de elektroforesetijd is cruciaal voor het verkrijgen van nauwkeurige en reproduceerbare resultaten.Onze laboratoriumcollega biedt aanbest practices voor het beheer van deze parameters tijdens SDS-PAGE-gelelektroforese.
Beijing Liuyi Biotechnologie gel-elektroforese producten
Monstervolume: consistentie garanderen
Bij het uitvoeren van SDS-PAGE-elektroforese is het monstervolume een sleutelfactor die de resolutie van uw resultaten aanzienlijk kan beïnvloeden. Over het algemeen wordt aanbevolen om 10 µl totaal eiwit per putje te laden. Om consistentie te garanderen en monsterdiffusie tussen aangrenzende putjes te voorkomen, is het belangrijk om in alle lege putjes een gelijk volume van 1x laadbuffer te laden. Deze voorzorgsmaatregel helpt de verspreiding van monsters naar aangrenzende rijstroken te voorkomen, wat kan gebeuren als de put leeg blijft.
Voordat u uw monsters laadt, moet u altijd beginnen met het toevoegen van een molecuulgewichtsmarkering aan één putje. Dit maakt een gemakkelijke identificatie van de eiwitgroottes na elektroforese mogelijk.
Spanningsregeling: evenwicht tussen snelheid en resolutie
De tijdens elektroforese aangelegde spanning heeft rechtstreeks invloed op zowel de snelheid waarmee monsters door de gel migreren als de resolutie van de scheiding. Voor SDS-PAGE is het raadzaam om te beginnen met een laagspanning van ongeveer 80V. Door deze aanvankelijke lage spanning kunnen de monsters langzaam en gelijkmatig migreren, waardoor ze in een scherpe band worden geconcentreerd wanneer ze de scheidingsgel binnendringen.
Zodra de monsters volledig in de scheidingsgel zijn opgenomen, kan de spanning worden verhoogd tot 120V. Deze hogere spanning versnelt de migratie en zorgt ervoor dat de eiwitten efficiënt worden gescheiden op basis van hun molecuulgewicht. Het is essentieel om de voortgang van het broomfenolblauwe kleurstoffront te volgen, wat de voltooiing van de elektroforese aangeeft. Voor gels met een concentratie van 10-12% is 80-90 minuten doorgaans voldoende; Voor 15% gels kan het echter zijn dat u de looptijd iets moet verlengen.
Timemanagement: weten wanneer je moet stoppen
Timing is een andere kritische factor bij gelelektroforese. Het te lang of te kort laten werken van de gel kan tot een suboptimale scheiding leiden. De migratie van de broomfenolblauwe kleurstof is een nuttige indicator: wanneer deze de bodem van de gel bereikt, is het meestal tijd om de run te stoppen. Voor standaardgels, zoals 10-12%, is een elektroforeseduur van ongeveer 80-90 minuten doorgaans voldoende. Voor gels met een hoger percentage, zoals 15%, moet de looptijd worden verlengd om volledige scheiding van eiwitten te garanderen.
Bufferbeheer: buffers hergebruiken en voorbereiden
Elektroforesebuffer kan 1-2 keer worden hergebruikt, afhankelijk van de specifieke omstandigheden van uw laboratorium. Voor optimale resultaten wordt echter aanbevolen om verse 10x buffer te bereiden en deze vlak voor gebruik te verdunnen. Dit zorgt ervoor dat de buffer zijn effectiviteit behoudt, wat leidt tot betrouwbaardere elektroforeseresultaten.
Beijing Liuyi Biotechnologie gel-elektroforese producten
Door het monstervolume, de spanning en de elektroforesetijd zorgvuldig te regelen, kunt u de nauwkeurigheid en reproduceerbaarheid van uw gelelektroforeseresultaten aanzienlijk verbeteren. Door deze best practices in uw laboratoriumwerk te implementeren, kunt u duidelijkere en duidelijkere banden bereiken, wat leidt tot betere gegevens voor stroomafwaartse analyses.
Als u meer goede methoden heeft om het gelelektroforese-experiment te optimaliseren, neem dan gerust contact met ons op!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) is al meer dan 50 jaar gespecialiseerd in de productie van elektroforese-instrumenten met ons eigen professionele technische team en R&D-centrum. We beschikken over een betrouwbare en complete productielijn, van ontwerp tot inspectie, magazijn en marketingondersteuning. Onze belangrijkste producten zijn elektroforesecellen (tank / kamer), elektroforesevoeding, blauwe LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbeeld- en analysesysteem enz. We leveren ook laboratoriuminstrumenten zoals PCR-instrument, vortexmixer en centrifuge voor laboratorium.
Als u een aankoopplan heeft voor onze producten, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen. U kunt ons een bericht sturen via e-mail[e-mailadres beveiligd]of[e-mailadres beveiligd], of bel ons op +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 toe, of Wechat: 15810650221.
Scan de QR-code om toe te voegen op WhatsApp of WeChat.
Posttijd: 20 augustus 2024