Beginsel
Celluloseacetaatfilmelektroforese is een elektroforesemethode waarbij een celluloseacetaatfilm als drager wordt gebruikt. Het fenomeen waarbij geladen deeltjes onder invloed van een elektrisch veld naar de tegenovergestelde elektrode bewegen, wordt elektroforese genoemd. Omdat elk eiwit een specifiek iso-elektrisch punt heeft, zal het eiwit, als het in een oplossing wordt geplaatst met een pH lager dan het iso-elektrische punt, positief geladen zijn en naar de negatieve elektrode bewegen. Integendeel, het beweegt naar de positieve pool. Omdat de snelheid van eiwitmoleculen die in een elektrisch veld bewegen verband houdt met hun lading, de vorm en de grootte van de moleculen, kunnen verschillende eiwitten door elektroforese worden gescheiden. Serum bevat een verscheidenheid aan eiwitten, die allemaal iso-elektrische punten hebben bij een pH van 7,5 of minder. Wanneer serum in buffer met pH 8,6 wordt geplaatst om elektroforese uit te voeren, zijn alle serumeiwitten negatief geladen en zullen ze in het elektrische veld naar de positieve kant bewegen. Omdat verschillende serumeiwitten bij dezelfde pH verschillende ladingen hebben, zijn de moleculaire deeltjes verschillend in grootte, en dus ook de migratiesnelheid, en worden ze gescheiden door elektroforese. De iso-elektrische punten en molecuulgewichten van serumeiwitten worden weergegeven in de onderstaande tabel:
| Eiwit | Iso-elektrische punten (PI) | Moleculair gewicht |
| Albumine | 4,88 | 69 000 |
| α1-glouline | 5.00 uur | 200 000 |
| α2-glouline | 5.06 | 300 000 |
| β-glouline | 5.12 | 9 000 ~ 150 000 |
| γ-glouline | 6,85 ~ 7,50 | 156.000 ~ 300.000 |
Het experiment is om verschillende eiwitten in bloedserum te scheiden met celluloseacetaatmembraan (afgekort CAM) als ondersteuningsmedium. CAM is een soort geschuimde loosefilm met goede uniformiteit en de dikte is 0,1 mm-1,5 mm, wat een zekere waterabsorptie heeft.
Materialen, instrumenten en reagentia voor CAM-elektroforese
Monsters:gezond menselijk bloedserum
Instrument:voeding DYY-6C, elektroforesetank DYCP-38C, superieure monsterlading WD-9404
De reagentia
1) celluloseacetaatmembraan 7X9cm
2) PH 8,6 barbitolbufferoplossing (ionsterkte 0,05-0,09, het is 0,06 tid tijd): neem 1,84 g diethylbarbituurzuur en neem vervolgens 1,03 g diethylnatriumpentobarbital, voeg wat gedestilleerd water toe om te verwarmen om op te lossen, en maak tot 1000 ml;
3) Vlek: Ponceau S 0,2 g, trichloorazijnzuur 3 g, voeg 100 ml gedestilleerd water toe;
4) TBS/T of PBS/T: 45 ml 95% ethanol, 5 ml ijsazijn, voeg 50 ml gedestilleerd water toe;
5) Reinigingsoplossing: 70 ml watervrije ethanol, 30 ml ijsazijn.
Experimenteermethoded
1) Bereid het membraan voor: Dompel het membraan 30 min-8 uur onder in de barbitolbufferoplossing en haal het eruit, verwijder de extra oplossing met absorberend papier.
2) Monsters laden: Onderscheid de ruwe en de gladde zijde van het membraan en markeer een lijn op 1,5 cm afstand van het bovenste uiteinde op de ruwe zijde. Laad monsters met een superieur monsterlaadgereedschap aan de ruwe kant. Opmerking: De monsters moeten op de ruwe kant van het membraan worden geladen. Nadat de serummonsters volledig in het membraan zijn gepenetreerd, draait u het membraan om, plaatst u de ruwe kant (met monsters) naar beneden in de tank en wordt het uiteinde met monsters in de negatieve elektrode geplaatst.
3) Elektroforese: Schakel de voeding in, 0.4~0,6 m A/cm-membraan, de looptijd is 30-45 minuten. Schakel na het uitvoeren van de elektroforese de stroom uit.
4) Vlekken en reinigen: Haal het membraan uit de tank en dompel het onderit in de kleurstofoplossing gedurende 5 minuten en reinig het vervolgens 3-4 keer in de reinigingsoplossing totdat de achtergrondkleur helder is. De serumeiwitten moeten op de banden zichtbaar zijn, en normaal gesproken zijn er vijf zones, vanaf het bovenste uiteinde van de gemarkeerde lijn: albumine, α1-glouline, α2-glouline, β-glouline, γ-glouline.
5) Behoud: plaats de droge elektroforesebandin een reinigingsoplossing gedurende 10-15 minuten, en haal het er dan uit en plak het op een schoon glas, nadat het is opgedroogd, wordt het een transparante filmband.
ExperimentResultaat
Het scheidingseffect van serummonsters is goed en er is geen sprake van bandstaartverschijnsel. De herhaalbaarheid van de resultaten varieert als gevolg van de testprocedures en de methoden van de onderzoeker, en de herhaalbaarheid is hoog.
Conclusie
Het snelle detectiesysteem voor klinische elektroforese (Elektroforese tankDYCP-38C,voedingDYY-6C en superieure monsterlading WD-9404) geproduceerd door onzebedrijf Beijing Liuyi Biotechnologie Co., Ltdvoldoet aan de experimentele eisen,Ende resultaten zijn reproduceerbaar, eenvoudig en snel, geschikt vooronderwijsonderzoek.
Peking LiuyiBiotechnology Co.,Ltd is gespecialiseerd in de productie van elektroforeseproducten voor de life science-industrieheeft meer dan 50 jaar geschiedenis in China en het bedrijf kan over de hele wereld stabiele en hoogwaardige producten leveren. Door jarenlange ontwikkeling is het uw keuze waard!
We zijn nu op zoek naar partners, zowel OEM-elektroforesetanks als distributeurs zijn welkom.
Voor meer informatie over ons kunt u per e-mail contact met ons opnemen[e-mailadres beveiligd]of[e-mailadres beveiligd].
Posttijd: 14-nov-2022