Comet Assay (Single Cell Gel Electroforesis, SCGE) is een gevoelige en snelle techniek die voornamelijk wordt gebruikt om DNA-schade en herstel in individuele cellen op te sporen. De naam “Comet Assay” komt van de karakteristieke komeetachtige vorm die in de resultaten verschijnt: de kern van de cel vormt de “kop”, terwijl de beschadigde DNA-fragmenten migreren, waardoor een “staart” ontstaat die lijkt op een komeet.
Beginsel
Het principe van de Comet Assay is gebaseerd op de migratie van DNA-fragmenten in een elektrisch veld. Intact DNA blijft in de celkern, terwijl beschadigd of gefragmenteerd DNA naar de anode migreert en zo de ‘staart’ van de komeet vormt. De lengte en intensiteit van de staart zijn recht evenredig met de omvang van de DNA-schade.
Procedure
- Celvoorbereiding: De te testen cellen worden gemengd met agarose met een laag smeltpunt en uitgespreid op microscoopglaasjes om een uniforme laag te vormen.
- Cellysis: De objectglaasjes worden ondergedompeld in een lysisoplossing om het celmembraan en het kernmembraan te verwijderen, waardoor het DNA bloot komt te liggen.
- Elektroforese: De objectglaasjes worden onder alkalische of neutrale omstandigheden in een elektroforesekamer geplaatst. Beschadigde DNA-fragmenten migreren onder invloed van het elektrische veld naar de positieve elektrode.
- Kleuring: Na elektroforese worden de objectglaasjes gekleurd met een fluorescerende kleurstof (bijv. ethidiumbromide) om het DNA zichtbaar te maken.
- Microscopische analyse: Met behulp van een fluorescentiemicroscoop of gespecialiseerde software worden de komeetvormen geanalyseerd en worden parameters zoals staartlengte en intensiteit gemeten.
Afbeelding van biorender
Gegevensanalyse
De resultaten van de Comet Assay worden geëvalueerd op basis van verschillende belangrijke parameters:
- Staart lengte: Vertegenwoordigt de afstand die het DNA migreert en geeft de omvang van de DNA-schade aan.
- Staart-DNA-inhoud: Het percentage DNA dat in de staart migreert, vaak gebruikt als kwantitatieve maatstaf voor DNA-schade.
- Olijfstaartmoment (OTM): Combineert zowel staartlengte als staart-DNA-inhoud om een uitgebreidere meting van DNA-schade te bieden.
Toepassingen
- Genotoxiciteitsstudies: De Comet Assay wordt veel gebruikt om de effecten van chemicaliën, medicijnen en straling op cel-DNA te beoordelen, waardoor het een belangrijk hulpmiddel is voor het testen van genotoxiciteit.
- Milieutoxicologie: Het helpt bij het analyseren van de impact van milieuverontreinigende stoffen op het DNA van organismen en biedt inzicht in de veiligheid van ecosystemen.
- Medisch en klinisch onderzoek: De Comet Assay wordt gebruikt bij het bestuderen van DNA-reparatiemechanismen, kanker en andere DNA-gerelateerde ziekten. Het evalueert ook de impact van kankertherapieën zoals radiotherapie en chemotherapie op DNA.
- Voedsel- en landbouwwetenschappen: Wordt gebruikt om de veiligheid van pesticiden, voedseladditieven en andere stoffen te beoordelen, en om hun toxische effecten in diermodellen te bestuderen.
Voordelen
- Hoge gevoeligheid: Kan lage niveaus van DNA-schade detecteren.
- Eenvoudige bediening: De techniek is eenvoudig en daardoor geschikt voor screening met hoge doorvoer.
- Brede toepassing: Het kan worden toegepast op verschillende celtypen, waaronder dierlijke en plantaardige cellen.
- Kwantificeringsproblemen: Hoewel kwantitatieve analyse kwalitatieve gegevens over DNA-schade oplevert, is deze sterk afhankelijk van software en beeldanalysetechnieken.
- Experimentele omstandigheden: Resultaten kunnen worden beïnvloed door factoren zoals de elektroforesetijd en pH, waardoor een zorgvuldige controle van de experimentele omstandigheden vereist is.
Beperkingen
De Comet Assay is een hulpmiddel van onschatbare waarde in biomedisch onderzoek, milieuwetenschappen en de ontwikkeling van geneesmiddelen vanwege de flexibiliteit en hoge gevoeligheid bij het detecteren van DNA-schade en -reparatie. Beijing Liuyi Biotechnology Co.Ltd (Liuyi Biotechnologie)biedt een horizontale elektroforesekamer voor komeetanalyse. Welkom bij contact met ons om te praten over deKomeettestprotocol.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) is al meer dan 50 jaar gespecialiseerd in de productie van elektroforese-instrumenten met ons eigen professionele technische team en R&D-centrum. We beschikken over een betrouwbare en complete productielijn, van ontwerp tot inspectie, magazijn en marketingondersteuning. Onze belangrijkste producten zijn elektroforesecellen (tank / kamer), elektroforesevoeding, blauwe LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbeeld- en analysesysteem enz. We leveren ook laboratoriuminstrumenten zoals PCR-instrument, vortexmixer en centrifuge voor laboratorium.
Als u een aankoopplan heeft voor onze producten, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen. U kunt ons een bericht sturen via e-mail[e-mailadres beveiligd]of[e-mailadres beveiligd], of bel ons op +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 toe, of Wechat: 15810650221.
Scan de QR-code om toe te voegen op WhatsApp of WeChat.
Posttijd: 20 september 2024