Monstervoorbereiding enLaden
Vanwege het gebruik van een continu buffersysteem zonder stapelgel moeten de monsters in de meeste gevallen een geschikte concentratie en een klein volume hebben. Gebruik eenpipetom het monster langzaam toe te voegen, met 5-10 μg per putje, om een significante afname van de resolutie te voorkomen. Wanneermonster laden, moet de stroomtoevoer uitgeschakeld zijn. Het monster moet een indicatorkleurstof (0,025% broomfenolblauw of oranje) en sucrose (10-15%) of glycerol (5-10%) bevatten om de dichtheid te verhogen, het monster te concentreren en diffusie te voorkomen. Soms kunnen sucrose of glycerol echter U-vormige banden veroorzaken bij elektroforeseresultaten, wat kan worden vermeden door 2,5% Ficoll (polyvinylpyrrolidon) te gebruiken.
Elektroforese
De spanning voor elektroforese bedraagt 5-15 V/cm, doorgaans rond de 10 V/cm. Voor de scheiding van grote moleculen moet de spanning lager zijn, doorgaans niet hoger dan 5 V/cm.
Kleuring
Fluorescerende kleurstof ethidiumbromide (EB) wordt vaak gebruikt voor kleuring om DNA-banden in agarosegel waar te nemen. EB kan tussen basenparen van DNA-moleculen invoegen, waardoor EB zich met DNA bindt. De absorptie van 260 nm ultraviolet licht door DNA wordt overgebracht naar EB, en het gebonden EB zendt fluorescentie uit bij 590 nm in het roodoranje gebied van het zichtbare lichtspectrum. Het kleuren van de gel in een 1 mmol/L MgSO4-oplossing gedurende 1 uur kan de achtergrondfluorescentie verminderen die wordt veroorzaakt door ongebonden EB, waardoor de detectie van kleine hoeveelheden DNA wordt vergemakkelijkt.
EB-kleurstof heeft verschillende voordelen: het is gemakkelijk te gebruiken, breekt geen nucleïnezuren af, heeft een hoge gevoeligheid en kan zowel DNA als RNA kleuren. EB kan op elk moment aan het monster worden toegevoegd en gevolgd met behulp van UV-absorptie. Na kleuring kan EB worden verwijderd door extractie met n-butanol.
EB-kleurstof is echter een krachtig mutageen en tijdens het hanteren moeten voorzorgsmaatregelen worden genomen, zoals het dragen van polyethyleenhandschoenen. Acridine-oranje is ook een veelgebruikte kleurstof omdat deze onderscheid kan maken tussen enkelstrengige en dubbelstrengige nucleïnezuren (DNA, RNA). Het vertoont groene fluorescentie (530 nm) voor dubbelstrengige nucleïnezuren en rode fluorescentie (640 nm) voor enkelstrengige nucleïnezuren. Bovendien kunnen andere kleurstoffen zoals methyleenblauw, methyleengroen en chinoline B worden gebruikt voor kleuring.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) is al meer dan 50 jaar gespecialiseerd in de productie van elektroforese-instrumenten met ons eigen professionele technische team en R&D-centrum. We beschikken over een betrouwbare en complete productielijn, van ontwerp tot inspectie, magazijn en marketingondersteuning. Onze belangrijkste producten zijn elektroforesecellen (tank / kamer), elektroforesevoeding, blauwe LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbeeld- en analysesysteem enz.
We zijn nu op zoek naar partners, zowel OEM-elektroforesetanks als distributeurs zijn welkom.
Als u een aankoopplan heeft voor onze producten, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen. U kunt ons een bericht sturen via e-mail[e-mailadres beveiligd]of[e-mailadres beveiligd], of bel ons op +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 toe, of Wechat: 15810650221.
Scan de QR-code om toe te voegen op WhatsApp of WeChat.
Posttijd: 20 december 2023