1. Classificatie
Gelelektroforese is onderverdeeld in verticale typen (inclusief kolomgels en plaatgels) en horizontale typen (voornamelijk plaatgels) (Figuur 6-18). Over het algemeen is verticale scheiding iets beter dan horizontale, maar horizontale gelbereiding heeft minstens vier voordelen: er is ondersteuning onder de gehele gel, waardoor het gebruik van agarose met een lage concentratie mogelijk is; het is mogelijk om agarosegelplaten met verschillende specificaties te bereiden; gelvoorbereiding en monsterladen zijn handiger; de elektroforesekamer is eenvoudig te construeren en kosteneffectief. Omdat horizontale elektroforese wordt uitgevoerd terwijl de agarosegelplaat volledig ondergedompeld is, ongeveer 1 mm onder het oppervlak van de elektroforesebuffer, wordt dit ook ondergedompelde elektroforese genoemd.
Elektroforesetank DYCP-31DN voor agarosegelelektroforese
2. Buffersysteem
Bij de scheiding van nucleïnezuren gebruiken de meeste systemen continue systemen. Veelgebruikte elektroforesebuffers zijn onder meer TBE (0,08 mol/l Tris·HCl, pH 8,5, 0,08 mol/l boorzuur, 0,0024 mol/l EDTA) buffer en THE (0,04 mol/l Tris·HCl, pH 7,8, 0,02 mol/l natriumacetaat, 0,0018 mol/l EDTA)-buffer. Deze buffers worden over het algemeen bereid als 10x stockoplossingen en tijdens gebruik verdund tot de vereiste concentratie. De migratiesnelheden van lineair en circulair DNA in agarosegel variëren afhankelijk van de gebruikte buffer. In THE-buffer is de migratiesnelheid van lineair DNA groter dan die van circulair DNA, terwijl in TBE-buffer het tegenovergestelde waar is.
3. Bereiding van agarosegel
(1) Bereiding van horizontale agarosegel
(a) Bereid de vereiste concentratie agarosegel met behulp van 1x elektroforesebuffer.
(b) Verwarm de agarose tot volledige oplossing, hetzij in een kokend waterbad, op een magnetische roerder of in een magnetron. Koel de agaroseoplossing af tot 55°C en voeg ethidiumbromide (EB)-kleurstof toe tot een eindconcentratie van 0,5 μg/ml.
(c) Sluit de randen van glas- of acrylplaten af met een kleine hoeveelheid agarosegel, voeg een kam toe en plaats de kamtanden ongeveer 0,5 ~ 1,0 mm boven de plaat.
(d) Giet de gesmolten agarosegeloplossing continu in de glazen of acrylplaatvorm (de dikte hangt af van het volume van het DNA-monster), waarbij de introductie van luchtbellen wordt vermeden. Laat het op natuurlijke wijze stollen bij kamertemperatuur.
(e) Verwijder de kam voorzichtig nadat deze volledig is gestold. Voeg een geschikte hoeveelheid elektroforesebuffer toe aan de geltank en zorg ervoor dat de gelplaat ongeveer 1 mm onder het oppervlak van de elektroforesebuffer wordt ondergedompeld.
(2) Bereiding van verticale agarosegel
(a) Verwijder vet en resten van glasplaten door te wassen met ethanol.
(b) Plaats afstandsplaten tussen de voor- en achterdammen, lijn de randen van de afstandsplaten uit met de voor- en achterdammen en zet ze vast met klemmen.
(c) Voeg 2% agarose toe in 1x buffer tussen de randen van de afstandsplaten om een 1 cm hoge agaroseplug te vormen op de bodem van de gelgietkamer.
(d) Giet de gesmolten agarosegel in de gewenste concentratie, bereid in 1x buffer, in de gelkamer tot 1 cm onder de bovenkant.
(e) Plaats de kam en voorkom dat er luchtbellen onder de kamtanden terechtkomen. Soms kunnen er rimpels verschijnen bij de kamtanden tijdens het afkoelen van de agarosegel; in dergelijke gevallen voegt u eenvoudig wat gesmolten agarose aan de bovenkant toe om het te laten stollen.
(f) Verwijder de kam. Om bufferlekkage in de laadsleuf te voorkomen, sluit u de verbinding tussen de agarosegelplaat en de elektroforesekamer af met 2% agarose en voegt u de vereiste hoeveelheid buffer toe.
(g) Voeg 1x elektroforesebuffer toe aan de gelkamer.
(h) Laad DNA-monsters voorzichtig op de agarosegel onder de buffer.
Meer informatie over de basiskennis over agarosegelelektroforese delen we volgende week. Ik zou willen dat deze informatie nuttig zou zijn voor uw experiment.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) is al meer dan 50 jaar gespecialiseerd in de productie van elektroforese-instrumenten met ons eigen professionele technische team en R&D-centrum. We beschikken over een betrouwbare en complete productielijn, van ontwerp tot inspectie, magazijn en marketingondersteuning. Onze belangrijkste producten zijn elektroforesecellen (tank / kamer), elektroforesevoeding, blauwe LED-transilluminator, UV-transilluminator, gelbeeld- en analysesysteem enz.
We zijn nu op zoek naar partners, zowel OEM-elektroforesetanks als distributeurs zijn welkom.
Als u een aankoopplan heeft voor onze producten, aarzel dan niet om contact met ons op te nemen. U kunt ons een bericht sturen via e-mail[e-mailadres beveiligd]of[e-mailadres beveiligd], of bel ons op +86 15810650221 of voeg Whatsapp +86 15810650221 toe, of Wechat: 15810650221.
Scan de QR-code om toe te voegen op WhatsApp of WeChat.
Posttijd: 07-dec-2023